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葡萄糖激酶基因启动子-30位点PCR扩增的实验条件研究 论文发表

发布时间:2013-03-28所属分类:医学论文浏览:1

摘 要: 医学论文"葡萄糖激酶基因启动子-30位点PCR扩增的实验条件研究 论文发表"已完成论文发表流程,为保证"葡萄糖激酶基因启动子-30位点PCR扩增的实验条件研究 论文发表"论文的版权,不能够完整浏览…… [申请浏览] 主要仪器:PE9600基因扩增仪;BIO-RAD Power P

医学论文"葡萄糖激酶基因启动子-30位点PCR扩增的实验条件研究 论文发表"已完成论文发表流程,为保证"葡萄糖激酶基因启动子-30位点PCR扩增的实验条件研究 论文发表"……

主要仪器:PE9600基因扩增仪;BIO-RAD Power Pac 3000型电泳仪;Mini-PROTEIN Ⅱ型电泳槽及Gel Doc 1000紫外图像分析系统;TJ-6型低温离心机;430 pH计;p10, p100微量加样器。

主要试剂:5O D 260的寡核苷酸引物;100m m ol/L的dNTP;低熔点琼脂糖;5U/μl的Taq酶。

1.2 方法

模板的准备:本文使用的模板是从人体白细胞中应用酚/氯仿/异戊醇提取的基因组DNA [1]。提取的模板用100μl TE缓冲液,60℃加热10-15分钟溶解后,-20℃冰冻保存。

目的片段的扩增:寡核苷酸引物根据文献报道设计:上游引物为5’-CAAGGCGATTGAGTGGTCACCATG-3’,下游引物为5’-GACTGTGTCTCTCACATCCTAGCC-3’,扩增片段长度为258个碱基。反应体系中模板1μl,10×缓冲液3μl,加双蒸水至30μl条件不变,分别变化Taq酶、dNTP、引物、Mg 2+的浓度,按94℃预变性5min,后94℃1min,60℃1min,72℃1min进行35个循环,最后72℃延伸5min。用2%琼脂糖凝胶电泳,透射式紫外灯下观察扩增产物片段。

2 结果

2.1 PCR实验条件 论文发表

2.1.1通常PCR实验的酶用量范围为0.5U-2U。其他扩增条件不变的情况下设定系列Taq酶量0.5~5U之间。

结果表明,均可以扩增出目的DNA,产物量之间并无差异,但5U时出现非特异性扩增。为了使以后扩增更加有效,选择Taq酶量为1U。

2.1.2通常引物的浓度常用的范围为0.1-1μmol/L。高浓度的引物可能会引起反应的错配或非特异性产物。其他扩增条件不变的情况下设定系列引物浓度,范围设计在0.1~1μmol/L的浓度之间。结果表明,均有产物扩出,引物二聚体的浓度依次增加,但引物浓度超过0.3μmol/L时产物量接近最高而二聚体的浓度相对低;当到达1μmol/L时二聚体明显过剩,产物量反而降低;选择引物二聚体较少而产物量高时的引物浓度0.3μmol/L为最佳浓度。

2.1.3一般反应中每种dNTP的最终浓度可为20-200μm

医学论文葡萄糖激酶基因启动子-30位点PCR扩增的实验条件研究 论文发表[略]……………

一、概况 由于我国人民生活水平低和卫生资源溃乏,造成乙肝泛滥。据统计:我国有乙肝病毒携带者约1.5亿、慢性迁延性肝炎约2500万、慢性活动性肝炎约1000万、重症肝炎约150万、肝硬化约100万和肝癌16~30万。肝硬化和肝癌80%以上是由乙肝病毒引起,而且80%左

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